如為貼壁生長細胞，一般要求在轉(zhuǎn)染前一日，必須應(yīng)用胰酶處理成單細胞懸液，重新接種于培養(yǎng)皿或瓶，轉(zhuǎn)染當日的細胞密度以70-90%(貼壁細胞)或2×106-4×106細胞/ml(懸浮細胞)為宜，建議在轉(zhuǎn)染前4h換一次新鮮培養(yǎng)液。

  用于轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒DNA必須無蛋白質(zhì)，無RNA和其他化學(xué)物質(zhì)的污染，OD260/280比值應(yīng)在1.8以上。

  培養(yǎng)基中的血清

  在開始準備DNA和轉(zhuǎn)染試劑稀釋液時要使用無血清的培養(yǎng)基，因為血清會影響復(fù)合物的形成。其實，只要在DNA-轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物形成時不含血清，在轉(zhuǎn)染過程中是可以使用血清的。

  培養(yǎng)基中的抗生素

  抗生素是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。這些抗生素一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細胞的通透性，使抗生素可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低。

  設(shè)置陽性對照和陰性對照

  一般在轉(zhuǎn)染24-48h，靶基因即在細胞內(nèi)表達。根據(jù)不同的實驗?zāi)康模?4-48h后即可進行靶基因表達的檢測實驗。

  如若建立穩(wěn)定的細胞系，則可對靶細胞進行篩選，根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應(yīng)的藥物，常用的真核表達基因載體的標志物有潮霉素和新霉素等。